NY∕T 3195-2018 热带作物种质资源抗病虫鉴定技术规程 橡胶树棒孢霉落叶病(农业)
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ID： |
EFA0281525E44E54894C80D59D84FF1D |
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文件大小(MB)： |
0.69 |
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页数： |
11 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-25 |
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ICS 65.020,B 16 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3195-2018,热带作物种质资源抗病虫鉴定技术规程,橡胶树棒抱霉落叶病,Technical code of practice for resistance identification to diseases and insects of,tropical crops germpalsm-,Corynespora leaf fall disease of rubber tree,2018-03-15 发布2018-06 - 01 实施,中华人民共和国农业部发布,日IJ 1=1,本标准按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准由农业部农垦局提出,本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口,本标准起草单位中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,NY/ T 3195-2018,本标准主要起草人:黄贷修、刘先宝、李博勋、时涛、李超萍、蔡吉苗、陈奕鹏、杨扬,I,NY! T 3195-2018,热带作物种质资源抗病虫鉴定技术规程橡胶树棒子包霉落叶病,1 范围,本标准规定了橡胶树[ He，剧brasiliensis (Willd. ex A. J uss. ) Muell. Arg. ]棒子包霉落叶病抗病性评,价的术语和定义、病原菌分离鉴定及接种体制备A革牵挂鉴定、抗病性评价、抗病性评价有效性判定和结,下列文件对于,件。凡是不注日,3. 1,4. 1 病原菌分离鉴定,的反,从发病植株上选取有典‘配叶南~~i赖略离国a 叶病病原菌，通过单抱分离,法对分离物进行纯化，经致病性测-.画监通过形态学( 血，，-ITS 系统发育学分析确定为多主,棒抱菌，再用多主棒抱毒素的cas2 亚型和同想['JjlIJ 确定菌株的毒素类型(参见附录B) ,分别选择cas2 亚型和cas5 亚型的强致病力菌株用灭菌的超纯水保存备用,4 2 病原菌菌饼接种体制备,将保存的cas2 亚型和cas5 亚型多主棒抱病菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上(平板直径,9 cm) , (28 ::1::1) .C 恒温培养7 d ，用打孔器取菌落外缘的菌饼(直径5 . 0 mm) 作为接种体，对照则取同样,大小的空白PDA 培养基,4. 3 多主棒抱粗毒素提取液制备,4. 3. 1 改良培养基,改良Fries 3 号培养基: 煎糖20.0 g ，酒石酸馁5.0 g , KH2PO, 1. 0 g, NH,N03 1. 0 g, MgSO, ?,NY/ T 3195-2018,7H20 O. 5 g , NaCl O. 1 g ,CaC12 ?2H20 0. 13 g ，酵母膏1. 0 g ，蒸馈水1000 mL,4. 3. 2 粗毒素摄取液制备,从培养7d 的cas2 亚型和cas5 亚型多主棒子包病原菌菌落边缘打取3 个直径5mm 的菌饼，接种于,装有150mL 的改良Fri es 3 号培养液(培养液的配方见4.3. 1)中， (25 土1) 'C 恒温箱12 h 光暗交替静置,培养12 d 。将培养的菌液先用2 层元菌纱布过滤;滤液于室温5000 r/ min 离心10 min; 上清液先用,0.45μm 的针筒式微孔滤膜过滤器过滤，再用0. 22μm 针筒式微孔滤膜过滤器过滤，最后一次滤液即为,多主棒子包粗毒素提取液。制备好的粗毒素提取液于4'C 冰箱保存备用,5 抗病性鉴定,5. 1 病原菌菌饼接种鉴定,5. 1. 1 鉴定设计,鉴定时设" IAN873"为抗病对照品系， "PR107"为感病对照品系,每个品系选取5 片无病斑、完整的橡胶树淡绿期小叶，每片小叶作为1 个重复，每个重复设4 个接,种点，其中1 个接种点为空白对照,5. 1. 2 接种,用无菌的牙签在接种点处轻轻刺伤，将病原菌菌饼有菌丝的一面贴于叶片接种点的伤口处，对照则,用空白PDA 培养基贴于伤口处，用无菌的滤纸片蘸无菌水贴于菌饼上，叶片按品系贴好标签，置于,(28 土1) 'C保湿培养。24 h 后去除菌饼，继续保湿培养,5. 1.3 数据统计,接种处理3d 后进行调查。采用十字交叉法量取发病叶片病斑的直径，单位为厘米(cm) ，计算每张,小叶和品系平均值,5.2 粗毒素生物萎藩法鉴定,5.2. 1 鉴定设计,鉴定时设"IAN873"为抗病对照品系， "PR107"为感病对照品系,每个品系选取12 片橡胶树淡绿期小叶，每2 片小叶作为1 个重复，其中4 个重复用于粗毒素处理,2 个用空白培养基处理做对照,5. 2. 2 接种,用消毒的手术剪刀将选取叶片的叶柄去除，称重后，迅速转移到含有2 0 mL 粗毒素的50 mL 离心,管中，以空白改良Fries 3 号培养基作为对照。叶柄端朝下插入粗毒素提取液中，处理的橡胶树叶片置,于(2 5 土l) 'C 的恒温箱中12 h 光暗交替培养,5. 2. 3 数据统计,接种处理3d 后进行调查,处理后的叶片用干净的吸水纸吸去叶片表面的液体，称取处理后每张橡胶树叶片的质量，根据处理,后与处理前叶片质量的比值来计算水分损失,利用式(1)计算处理后的萎焉指数,R, - R WI = 丁二X 100 .. .. .. . .. (1),式巾:,WI 一-萎藉指数;,R，一一一对照叶片处理后与处理前的质量比值;,R， 一一处理叶片处理后与处理前的质量比值,5. 3 自然条件下抗病性评价,NY/ T 3195-2018,5.3. 1 对照品系,鉴定时设" I AN873"为抗病对照品系， "PR107"为感……
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